2015年7月,FDA頒布了指南的終稿文件,這份關(guān)鍵的指南文件,為制藥行業(yè)的分析方法驗證提供了技術(shù)指導。本文作者為了讓大家更好的理解和掌握此指南,根據工作經(jīng)驗,解讀如下,一起來(lái)看下具體詳情。

分析方法驗證一直是藥品研發(fā)和質(zhì)量控制的關(guān)鍵問(wèn)題,也是重點(diǎn)問(wèn)題,一直被制藥行業(yè)所關(guān)注。在2015年7月份之前,世界各國法規方頒布了一系列的相關(guān)指南或者指導原則:

---中國CDE頒布的<化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗證技術(shù)指導原則>;

---2015版藥典附錄XIX A<藥品質(zhì)量標準分析方法驗證指導原則>;

---ICH Q2;

---FDA指南

---FDA指南。

在2015年7月,FDA頒布了指南的終稿文件,這份關(guān)鍵的指南文件,為制藥行業(yè)的分析方法驗證提供了技術(shù)指導。為了讓大家更好的理解和掌握此指南,筆者根據工作經(jīng)驗,解讀如下。

這部指南介紹了很多內容,包括起草背景、法規要求、分析方法的研發(fā)、分析方法的內容要求、標準品和試劑的要求、分析方法驗證的要求、統計分析和模型、分析方法的生命周期管理、方法確認的內容。本文選擇關(guān)鍵點(diǎn),為各位介紹這份指南的技術(shù)要求。

第一部分:分析方法研發(fā)的要求

在方法研發(fā)的早期,應對方法的耐用性進(jìn)行評估和研究,因為該屬性可以幫助申請者決定提交哪個(gè)方法去獲得批準。研發(fā)早期的分析方法是基于對基礎方法學(xué)的了解和之前的經(jīng)驗來(lái)建立的。早期程序的實(shí)驗數據可以用于指導進(jìn)一步的研發(fā)。如果這些研發(fā)數據支持分析方法的驗證的話(huà),申請者應該在方法驗證部分提交相關(guān)的研發(fā)數據。

為了全面了解分析方法參數變更的影響,申請者應該采用一個(gè)系統的方法進(jìn)行方法耐用性研究(例如設計一個(gè)方法參數實(shí)驗)。開(kāi)始申請者應采用風(fēng)險評估,然后進(jìn)行多變量實(shí)驗。這樣的方法能讓申請者了解參數因子對方法性能的影響。對方法性能評估可以包括分析來(lái)自生產(chǎn)工藝中的中控階段到成品階段的樣品。從這些方法變化來(lái)源的研究中獲得的知識可以幫助申請者評估方法的性能。

第二部分:分析方法的內容要求

在這部分,FDA指南展開(kāi)介紹了很多內容,依次如下:

2.1原理/范圍

需要描述分析測試方法/技術(shù)(即分離、檢測)基本原理的情況。還要描述目標分析物和樣品類(lèi)型(例如原料藥、制劑、雜質(zhì)或生物液體中的化合物)。

2.2儀器/設備

在這部分需要描述所有需要的確認過(guò)的儀器和組件(例如儀器類(lèi)型、檢測器、柱子類(lèi)型、尺寸和可替代的柱子、過(guò)濾器類(lèi)型)。

2.3運行參數

需要提供確認過(guò)的優(yōu)化的參數設置和范圍(包括來(lái)自藥典或研發(fā)和/或驗證研究的允許調整),對于分析過(guò)程非常關(guān)鍵(例如流速、部件溫度、運行時(shí)間、檢測器設置、梯度、頂空進(jìn)樣器)。適當時(shí),可以使用經(jīng)驗參數設置和積分參數的樣圖來(lái)作為補充。

2.4試劑

在這部分需要提供:

---試劑或標準的描述

---化學(xué)品的級別(例如,USP/NF,美國化學(xué)協(xié)會(huì ),HPLC色譜級,或GC色譜級或無(wú)防腐劑的)

---來(lái)源(例如USP標準品,內部確認的對照物質(zhì),WHO國際標準/對照物質(zhì),CBER標準)

---純度(只有純的化學(xué)品需要)、狀態(tài)(例如干品,未干燥品)和濃度

---效價(jià)(CFR,USP所要求)

---存貯條件

---安全使用指示(以現行MSDS為準)

---驗證過(guò)的或書(shū)面確認的貨架儲存期

---生物試劑的新批號,例如,單克隆抗體、多克隆抗原、或細胞,可能需要包括進(jìn)一步確認程序,作為分析方法的一部分。

2.5樣品制備

各供試樣品的制備程序(例如提取方法、稀釋或濃縮、除鹽和超聲混合、震搖或超聲時(shí)間)。供試樣定性單樣配制方法,定量測試平行樣品配制方法,工作溶液適當的濃度單位(例如μg/ml或mg/ml),以及溶液的穩定性和存貯條件的信息。

2.6標準控制溶液制備

所有標準溶液和控制溶液的制備和使用程序。需要注明適當的濃度單位,有標準穩定性信息和存貯條件,包括校正標準、內部標準、系統適用性標準等。

2.7檢驗程序

對方法的逐步描述(例如平衡時(shí)間,掃描/進(jìn)針序列,空白,基底樣,樣品,控制樣,敏感溶液(雜質(zhì)方法)和在分析過(guò)程中維持系統適用有效性的標準樣)以及允許運行范圍和適當時(shí)的調整。

2.8系統適應性

對測試程序和參數進(jìn)行確證以保證系統(儀器、數據工作站和分析操作要點(diǎn)和分析的控制點(diǎn))能在使用時(shí)作為一個(gè)整體正確運行。適用于對照控制和樣品的系統適用性的可接受標準,如拖尾因子、精密度和分辨率可接受標準,在適當時(shí)可以進(jìn)行要求。色譜系統的系統適用性,參見(jiàn)FDA行業(yè)指南<色譜方法的驗證>和USP通論<621>色譜。

2.9計算

根據標識聲明和質(zhì)量標準(例如含量、特定和非特定雜質(zhì)和相對響應因子)進(jìn)行測試所得的數據分析(標準、控制、樣品)中所用的積分方法和代表性計算公式。其中應包括數據分析中所使用的所有數學(xué)變換或公式的描述,以及使用的所有修正因子的科學(xué)論證。

2.10數據的報告

與儀器的能力和可接受標準相一致的數字式數據的表現方式。方法中應指明要采用何種格式來(lái)報告結果(例如標識聲明的百分比,重量/重量,重量/體積),并指定所需報告的有效位數。美國材料試驗協(xié)會(huì )(ASTM)E29標準中描述了在測試數據中使用有效位數來(lái)決定與質(zhì)量標準符合性的標準規范。如果是色譜方法,申請者應該包括保留時(shí)間(RT)用于與標準品比較,相對保留時(shí)間(RRT)(已知和未知雜質(zhì))可接受范圍和樣品結果報告標準。

第三部分:標準品和試劑的要求

基準標準品和二級標準品和物質(zhì)在ICH指南中已有定義和討論:Q6B<質(zhì)量標準:生物技術(shù)/生物制品檢驗方法和可接受標準>和Q7<原料藥GMP指南>。申請者要確保所有的標準品均適合于其目的用途。申請者要嚴格遵守標準品存貯和使用條件及處理指令,避免改動(dòng)和污染,這可能會(huì )導致另外的雜質(zhì)和分析不準確。申請者應該在申報資料中包括各標準品和物質(zhì)適合于其用途的支持信息。適當時(shí),支持標準品和物質(zhì)的信息應包括確認試驗報告和檢驗報告(包括穩定性試驗方案、報告、相關(guān)已知雜質(zhì)概況資料)。對于BLA下的生物制品,要在年報中包括之后的標準品批次的確認。

標準品通?？梢詮腢SP處獲得,也可以通過(guò)EP、JP、WHO或國際標準技術(shù)委員會(huì )獲得。大量的生物產(chǎn)品標準品也可以從CBER處獲得。在美國上市的特定生物制品,CBER授權的標準品必須在產(chǎn)品放行上市前使用。從其它來(lái)源獲得的對照物質(zhì)應根據程序進(jìn)行確證,包括常規測試和ICH Q6B里所述的超出常規放行測試的項目。申請者應考慮矩陣方法來(lái)確證標準品。附加測試可以包括確定標準品的適用性,這可能在原料藥或藥品放行測試中發(fā)現不了(例如更全面的結構確證和效價(jià)、純度和雜質(zhì)矩陣技術(shù))。

新的標準品(官方的或自制的)要采用現行的標準品進(jìn)行確認/校正。對于生物制品標準品和物質(zhì),FDA建議申請者在確認新的標準品時(shí)采用雙軌方法,以防止質(zhì)量屬性的漂移。雙軌方法是將每個(gè)新的標準品與基準標準品進(jìn)行比較,這樣將其與臨床試驗物質(zhì)和現行生產(chǎn)工藝相關(guān)聯(lián)。

第四部分:分析方法驗證的要求

4.1非藥典分析方法

分析方法驗證是證明一個(gè)分析方法適合于其既定用途的過(guò)程。方法學(xué)和分析方法的目的應在開(kāi)始驗證研究之前進(jìn)行清楚的界定和了解。這種了解是來(lái)自于基于科學(xué)的方法研發(fā)和優(yōu)化研究。驗證數據必須是從申請者按GMP規范批準的方案中產(chǎn)生,方案中要有每個(gè)驗證項目的方法學(xué)描述,并確定和論述可接受標準,采用經(jīng)過(guò)確認的儀器實(shí)施驗證。應起草并實(shí)施原料藥和制劑分析物或對應基質(zhì)的分析混合物的驗證方案。申請者應該在申報資料中包括驗證研究及結果的詳細內容。

4.2驗證屬性項目

盡管并不是所有的驗證屬性適用于所有類(lèi)型的測試,但一般的驗證屬性包括:

Specificity 專(zhuān)屬性

Linearity 線(xiàn)性

Accuracy 準確度

Precision (repeatability, intermediate precision, and reproducibility) 精密度(重復性、中間精密度和再現性)

Range 范圍

Quantitation limit 定量限

Detection limit 檢出限

如果一個(gè)方法是經(jīng)過(guò)驗證的定量分析方法,可以檢出原料藥和制劑在存貯期間的質(zhì)量屬性的變化,則認為該方法是具有穩定性指示性的測試方法。為了證明一個(gè)穩定性指示檢驗方法的專(zhuān)屬性,要進(jìn)行一系列的挑戰。一些挑戰包括向樣品中加入目標分析物和所有已知的干擾物、經(jīng)過(guò)不同化驗室強降解試驗的樣品、實(shí)際藥品的樣品(通過(guò)最終生產(chǎn)工藝生產(chǎn)出)經(jīng)過(guò)長(cháng)期放置或在加速溫濕度條件下存貯。

4.3藥典分析方法

一個(gè)分析方法(例如USP/NF,AOAC國際的官方分析方法,或其它公認的標準對照)的適用性應在實(shí)際使用條件下經(jīng)過(guò)確認。證明USP/NF分析方法適用于原料藥或制劑的資料應包括在申報資料里,并且是從確認方案中產(chǎn)生的。

確認方案應包括,但不僅限于(1)要確認的藥典方法,預定的可接受標準,(2)方法學(xué)的詳細說(shuō)明(例如試劑、設備、配件、色譜條件、色譜柱、檢測器類(lèi)型、檢測器信號響應靈敏度、系統適用性、樣品制備和其穩定性)。該方法和確認程度應決定要包括在方案中的驗證項目測試(例如專(zhuān)屬性、LOD、LOQ、精密度、準確度)。在決定方案中應包括哪些驗證項目時(shí)的考慮取決于一些具體情況,如質(zhì)量標準限度設定是否嚴于藥典可接受標準,或RT或RRT概況由于原料藥合成路線(xiàn)、生產(chǎn)工藝或制劑基底不同而在色譜方法中有所變化。如果完全按照藥典方法實(shí)施,沒(méi)有偏差的話(huà),藥典含量方法不需要進(jìn)行耐用性研究。

第五部分:分析方法生命周期內的管理

分析方法(包括藥典方法)被成功驗證(或確認)和實(shí)施后,在其產(chǎn)品的生命周期中應遵守該方法,以持續保證方法保持適合其既定用途。應定期對方法表現進(jìn)行趨勢分析,評估是否需要對分析方法進(jìn)行優(yōu)化,或對全面或部分分析方法進(jìn)行再驗證。如果一個(gè)分析方法只能通過(guò)不斷調整分析方法里載明的運行參數來(lái)符合所建立的系統適用性要求,則應對該分析方法進(jìn)行再評估、再驗證,適當時(shí)進(jìn)行修正。

在一個(gè)產(chǎn)品的整個(gè)生命周期中,新的資料和風(fēng)險評估(例如對產(chǎn)品CQA有更好的了解,或發(fā)現新的雜質(zhì))可能會(huì )保證一個(gè)新的或替代的分析方法的研發(fā)和驗證。新技術(shù)可能會(huì )帶來(lái)產(chǎn)品質(zhì)量保證方面更多的了解和/或可信度。申報者應定期評估產(chǎn)品分析方法的適當性,考慮新的或可替代的方法。

預計在生命周期中會(huì )對分析方法進(jìn)行變更,因此要保留適當數據量的留樣進(jìn)行對比研究。樣品數量應基于科學(xué)原理以及風(fēng)險評估。對生產(chǎn)工藝較為敏感的復雜產(chǎn)品,其留樣可能是做對比研究的重要工具。

用于對比研究的留樣應包括代表上市藥品的樣品,如可能,還應包括關(guān)鍵的臨床試驗物料。

如果基于風(fēng)險的評估或其它原因導致對分析方法進(jìn)行變更,或采取新的方法取代舊的方法,或分析方法轉移至一個(gè)新的檢測場(chǎng)所,則要考慮進(jìn)行再驗證、新的驗證、分析方法對比研究或聯(lián)合進(jìn)行這些工作。在有些情形下,對原料藥或藥品生產(chǎn)工藝的變更也會(huì )導致分析方法再驗證。這些額外的研究討論如下:

5.1再驗證

在前面分析方法驗證部分所述原則適用于再驗證。如果對一個(gè)分析方法進(jìn)行了變更(例如對設備有變更,或試劑的變更,或因為生產(chǎn)工藝或配方有變更),則可能要考慮對分析方法進(jìn)行全部或部分再驗證。在和平工藝變更時(shí)可能也需要對分析方法進(jìn)行再驗證,例如可能影響分析方法性能的原料藥生產(chǎn)工藝變更(例如合成路線(xiàn)、發(fā)酵)或引入新的制劑配方。

申請者要進(jìn)行再驗證以保證分析方法維持其關(guān)鍵性能指標(例如專(zhuān)屬性、精密度、準確性)。再驗證的程度取決于變更的性質(zhì)。

5.2分析方法對比研究

分析方法對比研究要求一般是在申請者提議采用一個(gè)替代分析方法取代一個(gè)FDA批準的分析方法時(shí),或將一個(gè)分析方法從一個(gè)實(shí)驗室轉移至另一個(gè)實(shí)驗室時(shí)產(chǎn)生的。用于決定兩個(gè)分析方法的等同性的統計學(xué)方法信息,需要引用適當的文獻或文件。這些情況討論如下:

5.2.1可替代的分析方法

替代性分析方法是申請者用來(lái)代替FDA已經(jīng)批準的分析方法的一種分析方法。對于一個(gè)NDA或ANDA,申請者要將所有擬定的替代分析方法包括在申報資料中。申請者必須包括方法描述。在批準后,對于一個(gè)NDA或ANDA,或在BLA里批準但未包括在FDA法規里的分析方法,凡增加、修改或刪除替代分析方法均要在下一次年報中記載。

對于生物制品,FDA法規里可能很少包括分析方法。如果所需的分析方法在法規里進(jìn)行了描述,但申請者想使用一個(gè)方法來(lái)替代,申請者必須根據21 CFR 610.9(a)提交替代方法供審核和批準。申請者必須提交證據^證明方法修訂能確保生物制品的安全、純度、效價(jià)和有效性等同或優(yōu)于生物制品通用標準或附加標準中給出的方法或程序。對這樣程序的修訂需要在申報資料評估過(guò)程中或在批準后增補中獲得FDA批準。

申請者要分辨可替代性分析方法的使用(例如放行檢測、穩定性測試),提供其內容的合理性論證、驗證數據和與FDA批準的分析方法的對比數據。申請者要進(jìn)行分析方法對比研究,至少證明:

---新的方法配備了另外的控制手段,在其既定用途上等同或超過(guò)原始方法

---新的分析方法比原始方法更不易受到基質(zhì)的影響

如果采用新的檢驗方法能發(fā)同新的與工藝雜質(zhì)或產(chǎn)品變化產(chǎn)生的雜質(zhì)或所有新的雜質(zhì),則應對歷史批準的留樣進(jìn)行檢查,證實(shí)新方法檢出的變化/雜質(zhì)是因為新的方法靈敏度或選擇性增加的結果,而不是工藝雜質(zhì)變化的結果。

如果分析方法具有穩定性指示特性:

---應包括適當的樣品,比較新的方法和原始方法檢出相關(guān)產(chǎn)品變化和降解物的能力;

---對比時(shí)所分析的批次數應能提供足夠的統計性能;

---要采用適當的統計學(xué)方法來(lái)實(shí)施等同性、不低于或優(yōu)越性研究,來(lái)證明新方法或修訂過(guò)的方法的性能等同或優(yōu)于原始方法;

---要識別出用于比較產(chǎn)品檢測結果的統計學(xué)分析方法;

---適當時(shí),分析方法間所有觀(guān)察到的偏差或差異以及對比結果均應進(jìn)行討論,并提出解釋。

5.2.2分析方法轉移研究

分析方法轉移一般要使用轉移方案進(jìn)行管理,在方案中詳細寫(xiě)明要評估的參數,以及適用于結果的預定可接受標準。轉移研究通常包括兩個(gè)或更多化驗室或場(chǎng)所(轉出化驗室和接收化驗室),由其實(shí)施預先批準的轉移方案。轉出化驗室和接收化驗室使用具有代表性的足夠數量的測試物(例如相同批號的原料藥或制劑)。實(shí)施對比研究是為了評估準確度和精密度,特別是實(shí)驗室之間的差異。如果所轉移的分析方法也是穩定性指示性方法,則應在兩個(gè)化驗室均對強降解樣品或含有所要檢測的相關(guān)雜質(zhì)的樣品進(jìn)行檢測。USP通論<1224>分析方法轉移提供了關(guān)于此問(wèn)題的更多指南。

綜述

從上面的介紹來(lái)看,FDA最新分析方法驗證指南具有如下特點(diǎn):

第一、 更重視方法開(kāi)發(fā)的作用。根據QBD的理念,好的分析方法一定是開(kāi)發(fā)出來(lái)的,而不僅僅是驗證的結果。

第二、 分析方法的描述必須全面,在指南的分析方法內容要求部分,詳細介紹了分析方法應該含有的技術(shù)內容。這和國內很多企業(yè)分析規程只包括項目和限度的做法,是明顯不同的。一個(gè)只包括項目和限度的分析規程,是不完整的,不能體現分析方法的全貌。

第三、 分析方法必須實(shí)施生命周期內的管理,如果出現各類(lèi)變更,應該及時(shí)進(jìn)行再驗證。

第四、 FDA介紹了分析方法對比的要求的分析方法轉移的要求,這都是國內指導原則的不足之處,可以起到補充作用。